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PCR儀的維護應與其維護相互配合

更新時間:2020-02-18      點擊次數:918
        PCR儀利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前,常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。
  一、實驗操作注意事項:
  盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意:
  1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
  2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
  3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
  4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的精確度;
  5.加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
  6.操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;
  7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器較容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,建議使用可替換或高壓處理的加樣器。
  如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;
  8.重復實驗,驗證結果,慎下結論。
  二、定期運行維護
  1.PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
  2.PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1~2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。
  3.PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統,對風冷制冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。
  4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。

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