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酶標儀在鈣離子通道檢測方面的應用

更新時間:2017-03-17      點擊次數:4849
   酶標儀是一種精密的光學儀器,因此良好的工作環境不僅能確保其準確性和穩定性,還能夠延長其使用壽命。根據DINVDE0871條例,儀器應放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據DIN45635-19條例:   儀器應放置在低于40分貝的環境下。   為延緩光學部件的老化,應避免陽光直射。   操作時環境溫度應在15℃-40℃之間,環境濕度在15%-85%之間。   操作電壓應保持穩定。   操作環境空氣清潔,避免水汽,煙塵。   保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
  酶標儀用于檢測鈣離子通路主要通過兩種方式:1,熒光法。化合物與細胞膜上離子通道結合后,改變離子通道狀態,通道打開,鈣離子進入細胞。進入細胞后與細胞內鈣離子熒光指示劑結合,發出熒光后酶標儀捕獲,熒光強度與進入細胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑多用FLuo3,Fluo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透細胞膜進入細胞,進入細胞后被細胞內的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細胞內,鈣離子進入細胞后與之結合,會發出較強的熒光。2,發光法。水母發光蛋白復合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有當鈣離子(Ca2+)與該復合物結合后,腔腸素才能被氧化生成高能量產物Coelenteramide,同時釋放出CO2和藍色熒光(~466 nm)。正是此Ca2+依賴性的反應過程(見圖1),使得腔腸素非常適用于監測活細胞內鈣離子水平。與常規的熒光鈣離子指示劑相比,其主要具有以下幾個優點,1)能檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM至 >100μM;2)樣品無自體熒光,背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱,但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的靈敏度。3)水母發光蛋白復合體能夠穩定維持在細胞內,使其能夠進行數小時至數天的鈣離子監測。

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