新霉素(su)（Neomycin）ELISA檢測試劑盒

檢測原理

試劑盒(he)采用雙抗(kang)體一步夾心法酶聯免疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往(wang)預先包(bao)被新(xin)霉(mei)素(su)(Neomycin)捕(bu)獲(huo)抗(kang)原的(de)(de)(de)(de)包(bao)被微孔中，依次加入標(biao)(biao)本(ben)、標(biao)(biao)準品、HRP標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)檢測抗(kang)體，經過溫育并*洗滌。用底物(wu)TMB顯色(se)，TMB在過氧化(hua)物(wu)酶的(de)(de)(de)(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，并在酸(suan)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用下轉化(hua)成zui終的(de)(de)(de)(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)(de)(de)(de)深淺和樣品中的(de)(de)(de)(de) 新(xin)霉(mei)素(su)(Neomycin)呈正相關(guan)。用酶標(biao)(biao)儀在450nm 波長(chang)下測定(ding)吸光度（OD 值），計算樣(yang)品濃(nong)度。

樣品(pin)收集(ji)、處理及保存(cun)方法

1.  血清(qing)(qing)：使用不(bu)含熱原和內(nei)毒素的試(shi)管，操作過程(cheng)中(zhong)避免任何細(xi)胞刺激(ji)，收集血液后，3000轉(zhuan)離心10分鐘將血清(qing)(qing)和紅細(xi)胞迅速小心地分離。

2.  血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬酸(suan)鹽或(huo)肝素抗(kang)凝(ning)。3000轉離(li)心30分鐘取上清。

3.  細(xi)胞(bao)上清液(ye)：3000轉離心10分鐘(zhong)去(qu)除(chu)顆粒和聚合(he)物。

4.  組織勻(yun)漿：將組織加入(ru)適量生理鹽水搗碎(sui)。3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清(qing)。

5.  保存(cun)：如果樣(yang)(yang)本(ben)收(shou)集后不及時檢測，請按一次用量分(fen)裝，凍(dong)存(cun)于-20℃，避免反復凍(dong)融，在室溫下(xia)解(jie)凍(dong)并確保樣(yang)(yang)品均(jun)勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍(dong)。

自備物品(pin)

1. 酶標儀（450nm）
2. 高(gao)精度加(jia)樣器及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱(xiang)

操作注意事項

1.   試劑盒保存在2-8℃，使(shi)用(yong)前室溫平(ping)衡(heng)20分鐘(zhong)。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這(zhe)屬于(yu)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)，水浴(yu)加熱使(shi)結晶*溶解后再使(shi)用(yong)。
2.   實(shi)驗中不用的板條應立即放(fang)回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.   預處理后的樣本無(wu)需(xu)稀釋，直(zhi)接(jie)取10μL加樣即可。
4.   嚴格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書中(zhong)標明(ming)的時間、加液量及順序進(jin)行溫育(yu)操作。
5.   所有液體(ti)組分使用前充(chong)分搖勻。

試劑(ji)的準備

 20×洗滌緩沖液的稀(xi)釋：蒸餾水(shui)按1：20稀(xi)釋，即1份的20×洗滌緩沖液加(jia)19份的蒸餾水(shui)。

洗板方(fang)法(fa)

1.   手工(gong)洗(xi)板：甩盡孔內液(ye)體，每(mei)孔加滿洗(xi)滌液(ye)，靜置(zhi)1min后(hou)甩盡孔內液(ye)體，在吸水紙上拍干，如(ru)此洗(xi)板5次。
2.   自動洗(xi)板機：每孔注入洗(xi)液350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板5次。

操作步驟

1.   從(cong)室溫平衡20min后的鋁箔袋(dai)中取出(chu)所需板(ban)(ban)條，剩(sheng)余板(ban)(ban)條用自封袋(dai)密封放回4℃。
2.   設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   待測樣(yang)(yang)本孔先加待測樣(yang)(yang)本10μL，再加樣(yang)(yang)本稀釋液40μL；
4.   隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體50μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液(ye)體(ti)，吸水(shui)紙(zhi)上拍干，每孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，靜(jing)置1min，甩去洗滌液(ye)，吸水(shui)紙(zhi)上拍干，如此重復洗板5次(ci)（也可用洗板機洗板）。
6.   所有(you)孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   所有(you)孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的(de)OD值。

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