黃曲霉(AFT)ELISA檢測試劑盒

檢測原(yuan)理

試劑盒(he)采用雙抗(kang)體一步夾心法酶(mei)聯免疫(yi)吸附試驗（ELISA）。往預先包被 黃曲(qu)霉(mei)(AFT)捕獲(huo)抗(kang)原(yuan)的包被(bei)微(wei)孔(kong)中，依次加入標(biao)本、標(biao)準(zhun)品、HRP標記的檢(jian)測抗(kang)體，經過溫育并*洗滌(di)。用底物TMB顯色，TMB在過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色(se)，并在酸的(de)(de)作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)zui終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和樣品中的(de)(de) 黃曲霉(AFT)呈正相關。用酶(mei)標儀在450nm 波長(chang)下測定吸光度（OD 值），計算樣(yang)品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nei)毒(du)素的試管(guan)，操作過程(cheng)中避免任(ren)何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分(fen)鐘將血清和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速小心(xin)地(di)分(fen)離。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸鹽(yan)或肝素抗凝。3000轉(zhuan)離心(xin)30分鐘取上清。

3.  細(xi)胞上(shang)清液：3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘去除顆粒(li)和(he)聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入(ru)適量生(sheng)理鹽水搗碎。3000轉離(li)心10分鐘取上清(qing)。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按(an)一次(ci)用(yong)量分裝，凍(dong)存于-20℃，避免反(fan)復凍(dong)融，在室溫下(xia)解凍(dong)并確保樣品(pin)均勻地充分解凍(dong)。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫(wen)箱

操作(zuo)注意事項

1.   試(shi)劑盒保存在2-8℃，使用前室溫(wen)平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有(you)結晶，這(zhe)屬(shu)于正常現(xian)象，水浴加熱使(shi)結晶*溶解后再(zai)使(shi)用(yong)。
2.   實驗中不用的(de)板條應(ying)立即放回(hui)自(zi)封袋(dai)中，密封（低(di)溫干燥(zao)）保存。
3.   預處理后的樣本無(wu)需稀釋(shi)，直(zhi)接取(qu)10μL加樣即(ji)可。
4.   嚴格按(an)照說明書中標明的時間、加(jia)液量及順序進行溫育操(cao)作。
5.   所有液(ye)體組(zu)分(fen)使用前(qian)充分(fen)搖(yao)勻。

試劑的準備

 20×洗滌緩沖(chong)液(ye)的稀釋：蒸餾(liu)水(shui)按1：20稀釋，即(ji)1份(fen)的20×洗滌(di)緩沖液加19份的(de)蒸餾水。

洗(xi)板方法

1.   手工洗板：甩盡(jin)孔(kong)內(nei)液體，每孔(kong)加滿洗滌液，靜(jing)置1min后甩盡(jin)孔內液體，在吸水紙上拍(pai)干，如此洗板(ban)5次(ci)。
2.   自(zi)動洗板(ban)機(ji)：每孔(kong)注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操(cao)作(zuo)步驟

1.   從室(shi)溫平衡(heng)20min后的鋁箔袋中取(qu)出所(suo)需板條，剩余板條用(yong)自封袋密封放回(hui)4℃。
2.   設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   待測(ce)樣(yang)本孔(kong)先加(jia)待測(ce)樣(yang)本10μL，再(zai)加樣本稀釋液40μL；
4.   隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biao)記(ji)的檢測(ce)抗(kang)體50μL，，用封板膜封住(zhu)反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上拍干(gan)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液，靜置1min，甩去洗(xi)滌(di)液，吸水紙(zhi)上拍干，如此重復洗(xi)板(ban)5次（也可用(yong)洗板機洗板）。
6.   所有(you)孔加(jia)入底物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵育15min。
7.   所有孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定(ding)各孔的OD值。

試劑(ji)盒性能(neng)

1.  準(zhun)確性：標(biao)準(zhun)品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大(da)于等于0.9900。

2.  靈敏度(du)：zui低檢測濃度(du)小(xiao)于1.0 ng/mL。

3.  特(te)異(yi)性：不與其(qi)它可溶(rong)性結構類似物交叉(cha)反應。

4.  重復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間變異系數均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光(guang)防潮保存。

6.  檢測范圍：6.25 ng/ml -200ng/ml

黃曲霉 （AFT）ELISA試劑盒 黃曲霉 （AFT）ELISA試劑盒