苯乙醇(chun)胺A(Phenylethanolamine A)ELISA檢測試劑(ji)盒

檢測原理

試(shi)劑盒采用(yong)(yong)雙抗體(ti)一步(bu)夾心(xin)法(fa)酶聯免疫(yi)吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預先包(bao)(bao)被(bei) 苯乙(yi)醇胺A(Phenylethanolamine A)捕(bu)獲抗原的(de)(de)包(bao)(bao)被(bei)微孔中，依次(ci)加(jia)入標本(ben)、標準(zhun)品、HRP標記的(de)(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)，經過溫育(yu)并*洗滌。用(yong)(yong)底物TMB顯色(se)(se)，TMB在(zai)(zai)過氧化(hua)(hua)物酶的(de)(de)催化(hua)(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)(hua)成(cheng)藍色(se)(se)，并在(zai)(zai)酸的(de)(de)作用(yong)(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)(hua)成(cheng)zui終的(de)(de)黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)(de)深(shen)淺(qian)和樣品中的(de)(de) 苯乙(yi)醇胺A(Phenylethanolamine A)呈正相關(guan)。用(yong)(yong)酶標儀(yi)在(zai)(zai)450nm 波長下(xia)測(ce)定吸光度(du)（OD 值），計算樣品濃度(du)。

樣品收集、處理及保(bao)存方(fang)法

1.  血(xue)(xue)清：使用不含熱(re)原和內毒素(su)的試管，操作過程中避(bi)免任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激，收集血(xue)(xue)液后，3000轉(zhuan)離心10分鐘將血(xue)(xue)清和紅細(xi)胞迅速小心地分離。

2.  血(xue)漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝(gan)素抗凝。3000轉離(li)心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuan)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將組(zu)(zu)織(zhi)加入(ru)適量生理鹽(yan)水搗碎。3000轉離(li)心10分鐘(zhong)取上清。

5.  保存：如(ru)果樣(yang)本收集后(hou)不(bu)及時檢(jian)測(ce)，請按一(yi)次用(yong)量分裝(zhuang)，凍存于-20℃，避免反(fan)復凍融，在室溫下解凍并確保樣(yang)品均勻地充分解凍。

自備物(wu)品

1. 酶標(biao)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱

操作注意事(shi)項

1.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗(xi)滌液會有(you)結晶，這屬于正(zheng)常現象(xiang)，水浴加(jia)熱使結晶*溶解后再使用。
2.   實驗中(zhong)不用(yong)的板條應立(li)即放回自封袋(dai)中(zhong)，密封（低溫干燥）保存(cun)。
3.   預處(chu)理后的樣(yang)本無需稀釋，直接取10μL加(jia)樣(yang)即可。
4.   嚴格(ge)按(an)照說明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的時間、加液量及順序進行溫育操作(zuo)。
5.   所有(you)液體組(zu)分(fen)使用(yong)前充分(fen)搖勻。

試劑(ji)盒組成

注：標(biao)準品(pin)用(yong)標(biao)準品(pin)稀釋液依次稀釋為：500、250、125、62.5、31.2、0ng/ml.

試劑的(de)準備(bei)

 20×洗(xi)滌緩沖液(ye)(ye)的(de)稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即(ji)1份的(de)20×洗(xi)滌緩沖液(ye)(ye)加19份的(de)蒸餾水。

洗板方法(fa)

1.   手(shou)工洗(xi)板：甩盡(jin)孔(kong)(kong)內(nei)(nei)液體，每孔(kong)(kong)加滿洗(xi)滌液，靜置1min后甩盡(jin)孔(kong)(kong)內(nei)(nei)液體，在吸水(shui)紙(zhi)上拍干(gan)，如此洗(xi)板5次。
2.   自動洗板(ban)機：每孔注(zhu)入洗液350μL，浸泡1min，洗板(ban)5次。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔(bo)袋(dai)(dai)中取(qu)出所需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用自封袋(dai)(dai)密封放回4℃。
2.   設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.   待測(ce)樣(yang)(yang)本(ben)(ben)孔先(xian)加待測(ce)樣(yang)(yang)本(ben)(ben)10μL，再加樣(yang)(yang)本(ben)(ben)稀釋液40μL；
4.   隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體50μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.   棄去液(ye)(ye)體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍干，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)(ye)，靜(jing)置1min，甩去洗(xi)滌液(ye)(ye)，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上拍干，如此重(zhong)復洗(xi)板(ban)5次（也可用(yong)洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban)）。
6.   所有孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   所(suo)有孔加(jia)入終止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波長處測(ce)定(ding)各孔的OD值。

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