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環磷酸腺苷（cAMP） ELISA 試劑盒

工作原(yuan)理

本試劑盒(he)采用雙位點(dian)夾心酶(mei)聯免疫吸附法（ELISA），測(ce)定樣品中的水平。向預先包被抗體的酶標孔中加入標準品、待(dai)測(ce)樣本和(he)HRP標(biao)記的(de)抗體(ti)，經過溫育和洗滌，去除未結合(he)的(de)組分，然(ran)后再加入(ru)底物A、B，產生(sheng)藍色，并在酸的(de)(de)作用下轉化成終的(de)(de)黃(huang)色。顏色的(de)(de)深淺與樣品(pin)中的(de)(de)濃度呈(cheng)正相(xiang)關。

環磷酸腺(xian)苷（cAMP） ELISA 試劑(ji)盒

注(zhu)：標準(zhun)品用標準(zhun)品稀釋液依次(ci)稀釋為(wei)：100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要而未提(ti)供的試劑和器材

1.   37℃恒溫(wen)箱。

2.   標(biao)(biao)準(zhun)規格酶(mei)標(biao)(biao)儀。

3.   精密移(yi)液器(qi)及一次性吸頭

4.   蒸餾水，

5.   一次性(xing)試管

6.   吸水紙(zhi)

注意(yi)事項

1.   從2-8℃取出的試(shi)劑盒，在開啟試(shi)劑盒之(zhi)前要室溫平衡至少(shao)30分鐘。酶標(biao)包被板開(kai)封后如未用完，板條應裝入(ru)密(mi)封袋中保存。

2.   各步加樣(yang)(yang)均應使(shi)用(yong)加樣(yang)(yang)器，并經常(chang)校對其準確性，以避免試驗誤差

3.   建議所有標(biao)準品(pin)、樣本都(dou)做雙份檢測。

4.   嚴格按照說明(ming)書的(de)操作進行，試驗結果判(pan)定必(bi)須以(yi)酶標儀(yi)讀(du)數為準.

5.   為(wei)避免(mian)交叉污染，要避免(mian)重復(fu)使用手中的吸(xi)頭和封(feng)板(ban)膜。

6.   不(bu)(bu)用(yong)(yong)(yong)的其它試(shi)劑(ji)應包裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好(hao)。不(bu)(bu)同批號(hao)的試(shi)劑(ji)不(bu)(bu)要混用(yong)(yong)(yong)。保質前使用(yong)(yong)(yong)。

7.   底物B對光敏(min)感，避免長時(shi)間暴露于光下。

洗板(ban)方法

手工(gong)洗板方法(fa)：甩掉酶(mei)標(biao)(biao)板內的(de)液體(ti)；在實驗臺上鋪墊(dian)幾層(ceng)吸水紙，酶(mei)標(biao)(biao)板朝下(xia)用力拍幾次；將稀釋后(hou)的(de)洗滌(di)液至少0.35ml注入(ru)孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此(ci)過程數次(ci)。

自動洗板：如果有(you)自動洗板機，應在熟練使用(yong)后再用(yong)到正式實驗(yan)過(guo)程中(zhong)

標本(ben)要求

1．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧(yang)化物酶的（HRP）活性(xing)。

2．標本采集(ji)后盡早進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)后應(ying)盡快進(jin)行(xing)實驗(yan)(yan)。若(ruo)不能(neng)馬上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)(yan)，可將標本放(fang)于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作程序

1.   分別設空(kong)白(bai)孔（空(kong)白(bai)對照孔不加樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其余各(ge)步(bu)操作相同(tong)）、標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)孔、待測樣(yang)品(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包(bao)被板上標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)孔中加入標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)50μl；在(zai)酶標包被板上待測(ce)樣品孔中先加樣品稀釋(shi)液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品(pin)zui終稀釋度(du)為5倍）。每孔加(jia)入酶標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除(chu)外。輕輕晃(huang)動(dong)混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔加滿(man)稀釋后洗(xi)滌液，振蕩30秒，甩去洗滌(di)液(ye)，用吸(xi)水紙拍(pai)干。如(ru)此重復5次，拍干。

3.   每孔先加(jia)入顯色劑A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色15分鐘.

4.   取(qu)出酶(mei)標板，每孔加(jia)終止液(ye)50μl，終止反應（此時藍(lan)色立轉黃色）。

5.   測定：以空白孔調零，在450nm波長(chang)下測量(liang)各孔的(de)吸光(guang)度值（OD值(zhi)）。 測定應在加終止液后(hou)15分鐘以內(nei)進(jin)行。

6.   根(gen)據標準(zhun)品的濃度(du)及對應的OD值計(ji)算(suan)出標(biao)準曲線(xian)的直線(xian)回歸方(fang)程，再根(gen)據樣品的OD值在(zai)回(hui)歸方(fang)程(cheng)上計算(suan)出(chu)對應的(de)樣(yang)品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算(suan)。應記住由(you)于(yu)樣(yang)品稀釋了的(de)，其實際濃度應該(gai)乘以總稀釋倍數。