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結合珠(zhu)蛋(dan)白（Hpt）ELISA 試劑盒

工作(zuo)原理

本試劑盒(he)采用雙位(wei)點夾心酶聯免疫吸(xi)附法（ELISA），測定樣(yang)(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)的水平。向預先包被抗體(ti)的酶標(biao)孔中(zhong)(zhong)加入標(biao)準品(pin)、待測樣(yang)(yang)本和(he)HRP標記(ji)的抗(kang)體(ti)，經過溫育(yu)和洗(xi)滌，去除未結合的組分，然后(hou)再加入底(di)物(wu)A、B，產生(sheng)藍色(se)，并在酸的作用下轉化成終的黃色(se)。顏色(se)的深淺(qian)與(yu)樣品(pin)中的濃度(du)呈(cheng)正(zheng)相關。

結合珠(zhu)蛋(dan)白(bai)（Hpt）ELISA 試劑盒

注：標準(zhun)品(pin)用(yong)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液(ye)依次稀(xi)釋為：100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標準規格酶標儀。

3.   精密移(yi)液(ye)器(qi)及一(yi)次性(xing)吸頭

4.   蒸餾水，

5.   一次性試管(guan)

6.   吸(xi)水紙

注意事項(xiang)

1.   從2-8℃取出的試(shi)劑(ji)盒(he)，在開啟試(shi)劑(ji)盒(he)之前(qian)要室(shi)溫平(ping)衡至少30分鐘。酶標包(bao)被(bei)板開封(feng)(feng)后(hou)如未用完，板條(tiao)應(ying)裝入(ru)密封(feng)(feng)袋中(zhong)保存。

2.   各步加樣均應使用加樣器(qi)，并(bing)經常校對(dui)其準確性，以避免試(shi)驗誤(wu)差

3.   建(jian)議所(suo)有標準品、樣本都做雙份檢(jian)測(ce)。

4.   嚴格按照說明書(shu)的操(cao)作進(jin)行，試驗結果判(pan)定必須以(yi)酶標儀讀數為準.

5.   為避免交(jiao)叉(cha)污染，要避免重(zhong)復(fu)使用(yong)手中的(de)吸(xi)頭(tou)和封板(ban)膜。

6.   不用(yong)的其它試(shi)劑應包(bao)裝好(hao)或蓋好(hao)。不同批號的試(shi)劑不要混用(yong)。保質(zhi)前使用(yong)。

7.   底物B對(dui)光(guang)敏感，避(bi)免長時間暴露于光(guang)下。

洗(xi)板方(fang)法(fa)

手(shou)工洗(xi)板(ban)方法：甩(shuai)掉(diao)酶標(biao)板(ban)內(nei)的液體；在實驗臺上鋪墊幾(ji)層吸水紙，酶標(biao)板(ban)朝下(xia)用力拍幾(ji)次；將稀釋后的洗(xi)滌液至(zhi)少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分(fen)鐘。根據需要，重(zhong)復此過程數次(ci)。

自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)：如果有自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)機，應在(zai)熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本(ben)要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因(yin)NaN3抑制辣根過氧(yang)化物酶的（HRP）活性。

2．標(biao)本采集后盡(jin)早進(jin)行提取，提取按相關(guan)文獻進(jin)行，提取后應盡(jin)快進(jin)行實驗。若不能馬(ma)上進(jin)行試驗，可將標(biao)本放(fang)于-20℃保存，但應避(bi)免反復凍融

操作程序(xu)

1.   分別設空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不加樣品(pin)及酶標試劑(ji)，其(qi)余各步操作相同）、標準(zhun)品(pin)孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在酶標包被板(ban)上(shang)標準(zhun)品(pin)孔(kong)中加入標準(zhun)品(pin)50μl；在酶標(biao)包被板上(shang)待測樣品孔(kong)中先加樣品稀釋液40μl，然(ran)后再(zai)加待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)zui終稀釋(shi)度為(wei)5倍）。每孔加入酶標(biao)試劑50μl，空白孔除外。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻，37℃溫育60分鐘(zhong)。

2.   棄(qi)去液(ye)體，甩干(gan)，每孔加滿稀釋后洗滌液(ye)，振蕩30秒，甩去洗(xi)滌(di)液，用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍(pai)干。如(ru)此重復5次，拍干。

3.   每孔先加入顯色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色(se)15分(fen)鐘.

4.   取(qu)出酶標(biao)板，每孔(kong)加終止液50μl，終止(zhi)反應（此時(shi)藍(lan)色(se)立轉黃色(se)）。

5.   測定：以空(kong)白孔調(diao)零，在450nm波長下測量各(ge)孔的(de)吸光度值（OD值）。 測定應在加終(zhong)止液(ye)后15分鐘以內(nei)進(jin)行。

6.   根據標準品的濃(nong)度及對(dui)應的OD值計算出標(biao)準曲線(xian)的直線(xian)回歸方程，再根據樣(yang)品的OD值在回歸方程上計算出對(dui)應(ying)的(de)樣(yang)品濃度(du)(du)。也(ye)可(ke)以使用(yong)各種(zhong)應(ying)用(yong)軟件來計算。應(ying)記住由于樣(yang)品稀釋(shi)了的(de)，其實際濃度(du)(du)應(ying)該乘以總稀釋(shi)倍數。