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Ⅲ型前膠原（PCⅢ）ELISA 試(shi)劑(ji)盒

酶(mei)標(biao)抗體標(biao)記效果(guo)測定(ding)：測定(ding)內(nei)容(rong)包(bao)括(kuo)酶(mei)和抗體活性(xing)、結(jie)合物中酶(mei)含量和IgG含量、酶(mei)與IgG摩爾比(bi)值以及結(jie)合率。

Ⅲ型前膠原（PCⅢ）ELISA 試劑盒

間接法

間(jian)接(jie)法(fa)常用于(yu)檢測抗體，一(yi)般的操作步(bu)驟為：

1. 將(jiang)已知的(de)(de)抗原固(gu)著于塑膠(jiao)孔盤上(shang)，完成后洗去多余(yu)的(de)(de)抗原。

2. 加入待(dai)測檢體(ti)，檢體(ti)中若(ruo)含有(you)待(dai)測的一次抗體(ti)，則其(qi)會與(yu)塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。

3. 洗去多余待測(ce)檢體，加入帶有酶的(de)二次抗體，與(yu)待測(ce)的(de)一次抗體鍵結。

4. 洗去多余未鍵結(jie)二次抗(kang)體(ti)，加入酶(mei)底物使酶(mei)呈(cheng)色，藉儀器（ELISA reader）測(ce)定(ding)塑(su)膠(jiao)盤中的(de)吸(xi)光值（OD值），以(yi)評估有色終產(chan)物的(de)含(han)量即可測(ce)量待測(ce)抗(kang)體(ti)的(de)含(han)量。

操作程序

1.   分別設(she)空(kong)(kong)白(bai)孔（空(kong)(kong)白(bai)對照孔不加(jia)樣品及酶標(biao)試劑，其余各(ge)步操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準(zhun)品孔、待測樣品孔。在酶標(biao)包被板上標(biao)準(zhun)品孔中加(jia)入標(biao)準(zhun)品50μl；在酶標包(bao)被板上待測(ce)樣(yang)品孔(kong)中先加樣(yang)品稀釋液40μl，然后再加待測(ce)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為(wei)5倍(bei)）。每(mei)孔加入酶標試劑50μl，空白孔(kong)除外。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻(yun)，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔(kong)加(jia)滿(man)稀釋后(hou)洗滌液，振(zhen)蕩30秒，甩去洗滌液，用吸(xi)水(shui)紙拍干。如此重復5次，拍干。

3.   每孔先(xian)加(jia)入顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)色15分鐘(zhong).

4.   取出酶標板，每孔(kong)加終止液50μl，終止反應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色）。

5.   測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光(guang)度值（OD值(zhi)）。 測(ce)定應在加(jia)終止(zhi)液(ye)后15分鐘以內進行。

6.   根據標準品的濃(nong)度及對應(ying)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方(fang)程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(ying)的樣(yang)品濃度。也(ye)可以使用(yong)各種應(ying)用(yong)軟件來計算。應(ying)記住由于樣(yang)品稀釋了的，其實際濃度應(ying)該乘以總稀釋倍數。