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軟骨寡聚(ju)基質(zhi)蛋白（COMP）ELISA 試劑盒

酶與抗體(ti)(ti)(ti)交(jiao)聯，常用戊二醛法(fa)和過(guo)碘酸(suan)(suan)(suan)鹽氧化(hua)法(fa)。郭春(chun)祥建立的(de)(de)(de)HRP標記(ji)抗體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)改良過(guo)碘酸(suan)(suan)(suan)鈉法(fa)簡(jian)單(dan)易行，標記(ji)效果(guo)好，特別適用于實驗(yan)室(shi)的(de)(de)(de)小批量制(zhi)備。其標記(ji)程(cheng)序為：將(jiang)5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水(shui)中(zhong)，加(jia)(jia)入(ru)(ru)新鮮(xian)配(pei)制(zhi)的(de)(de)(de)0.06 mol/L的(de)(de)(de)過(guo)碘酸(suan)(suan)(suan)鈉（NaIO4）水(shui)溶液(ye)(ye)(ye)0.5ml，混(hun)勻置(zhi)4℃冰(bing)箱(xiang)30分(fen)鐘(zhong) ， 取出(chu)加(jia)(jia)入(ru)(ru)0.16mol/L的(de)(de)(de)乙二醇水(shui)溶液(ye)(ye)(ye)0.5ml，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)30分(fen)鐘(zhong)后加(jia)(jia)入(ru)(ru)含5(g純化(hua)抗體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)水(shui)溶液(ye)(ye)(ye)1ml，混(hun)勻并裝透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的(de)(de)(de)碳酸(suan)(suan)(suan)鹽緩沖液(ye)(ye)(ye)于4℃冰(bing)箱(xiang)中(zhong)慢(man)慢(man)攪(jiao)拌透析6小時（或過(guo)夜）使之(zhi)結合，然后吸出(chu)，加(jia)(jia)硼氫化(hua)鈉（NaBH4）溶液(ye)(ye)(ye)（ 5(g/ml)0.2ml，置(zhi)4℃冰(bing)箱(xiang)2小時，將(jiang)上述(shu)結合物混(hun)合液(ye)(ye)(ye)加(jia)(jia)入(ru)(ru)等體(ti)(ti)(ti)積飽和硫酸(suan)(suan)(suan)銨溶液(ye)(ye)(ye)，置(zhi)4℃冰(bing)箱(xiang)30分(fen)鐘(zhong)后離(li)心，將(jiang)所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中(zhong)，并對之(zhi)透析過(guo)夜（4℃），次日離(li)心除去不溶物，即得到酶標抗體(ti)(ti)(ti)，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至(zhi)5ml，進行測定后，冷凍干燥或低溫(wen)保存。

軟骨寡聚基質蛋白（COMP）ELISA 試(shi)劑盒

競爭法

1. 競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操(cao)作步(bu)驟為：

2. 將具有(you)專一(yi)性的(de)抗體固著于塑膠孔盤(pan)上，完成后洗去多余抗體

3. 加入待測檢體(ti)，使檢體(ti)中(zhong)的(de)(de)待測抗原與塑膠孔盤上(shang)的(de)(de)抗體(ti)進行專一性鍵結

操作程序

1.   分別設空(kong)白孔(kong)(kong)（空(kong)白對照孔(kong)(kong)不加(jia)樣品(pin)及酶標(biao)試劑，其余各步操(cao)作(zuo)相同）、標(biao)準品(pin)孔(kong)(kong)、待測(ce)樣品(pin)孔(kong)(kong)。在酶標(biao)包(bao)被板上標(biao)準品(pin)孔(kong)(kong)中加(jia)入標(biao)準品(pin)50μl；在酶標包被板上待測樣品(pin)孔中先加樣品(pin)稀釋(shi)液40μl，然后再加(jia)待(dai)測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每(mei)孔(kong)加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體(ti)，甩干，每孔加滿稀(xi)釋(shi)后洗滌液，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸(xi)水(shui)紙拍干。如此(ci)重(zhong)復(fu)5次，拍干。

3.   每孔先加入(ru)顯色劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避光(guang)顯色15分鐘.

4.   取(qu)出酶標板，每孔(kong)加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應（此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃色）。

需要而未提供的試劑(ji)和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標準規格酶標儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭(tou)

4.   蒸(zheng)餾水，

5.   一次(ci)性試管

6.   吸水紙(zhi)