詳細請咨詢銷(xiao)售人員：

細胞色素C氧化酶(mei)（COX）ELISA 試劑盒

堿性磷酸酶

系(xi)從小牛腸粘(zhan)膜和(he)大腸桿菌中提取，由多個(ge)同功酶(mei)組成(cheng)。它們的(de)底(di)物(wu)種類很多，常(chang)用者為(wei)硝基苯磷(lin)(lin)酸鹽，廉價無毒性。酶(mei)解(jie)產物(wu)呈(cheng)黃(huang)色，可溶，大吸收值(zhi)在(zai)400nm。酶(mei)的(de)活性以在(zai)pH10反應系(xi)統中，37℃1分鐘水解(jie)1μg磷(lin)(lin)酸苯二(er)鈉為(wei)一個(ge)單位。

細胞色素C氧(yang)化酶（COX）ELISA 試劑(ji)盒

定量測定

ELISA操(cao)作步驟復雜，影響反應因(yin)素較(jiao)多，特別(bie)是固相(xiang)載體(ti)的(de)(de)(de)包被難達到(dao)各個體(ti)之間的(de)(de)(de)*，因(yin)此在定量測(ce)定中(zhong)，每(mei)批(pi)測(ce)試均須用一(yi)(yi)(yi)系列不同(tong)濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)參考標(biao)(biao)準品在相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)條件(jian)下(xia)制作標(biao)(biao)準曲(qu)線。測(ce)定大分(fen)(fen)子量物質(zhi)的(de)(de)(de)夾心(xin)法(fa)ELISA，標(biao)(biao)準曲(qu)線的(de)(de)(de)范圍一(yi)(yi)(yi)般較(jiao)寬，曲(qu)線高點的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)可接近2.0，繪(hui)制時(shi)常用半對數值，以檢測(ce)物的(de)(de)(de)濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐標(biao)(biao)，以吸(xi)光(guang)度(du)為(wei)縱坐標(biao)(biao)，將各濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)值逐點連接，所得曲(qu)線一(yi)(yi)(yi)般呈(cheng)S形，其(qi)頭、尾部曲(qu)線趨于平(ping)坦，中(zhong)央較(jiao)呈(cheng)直線的(de)(de)(de)部分(fen)(fen)是理(li)想的(de)(de)(de)檢測(ce)區域。

測定(ding)小(xiao)分(fen)子(zi)量物(wu)質常用競爭法，其標準曲(qu)線(xian)中(zhong)吸光度與受檢(jian)物(wu)質的濃度呈負相關。標準曲(qu)線(xian)的形狀因試劑(ji)盒所(suo)用模(mo)式的差別而略有不(bu)同(tong)。ELISA測定(ding)的標準曲(qu)線(xian)注意圖中(zhong)橫坐(zuo)標為對數關系(xi)，這更有利于測定(ding)系(xi)統的表達。

操作程序

1.   分別設空白孔（空白對照孔不加樣品(pin)(pin)及酶(mei)標(biao)試劑，其(qi)余各步操作相同(tong)）、標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)孔、待測樣品(pin)(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包被(bei)板上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)孔中加入標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先(xian)加樣品稀釋(shi)液40μl，然后再加(jia)待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔(kong)加入(ru)酶標試(shi)劑50μl，空(kong)白孔(kong)除外。輕(qing)輕(qing)晃動混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔(kong)加(jia)滿(man)稀(xi)釋后洗滌(di)液，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩去洗(xi)滌液，用吸水紙(zhi)拍(pai)干(gan)。如此重復5次，拍干(gan)。

3.   每孔先(xian)加入顯色(se)劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避(bi)光顯色(se)15分鐘.

4.   取出酶標(biao)板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

5.   測定(ding)：以(yi)空(kong)白孔調零，在450nm波長下測(ce)量各孔(kong)的吸光度(du)值（OD值(zhi)）。 測定應在加(jia)終止液后15分鐘以內(nei)進行。

6.   根據(ju)標準品(pin)的濃(nong)度及對應的OD值(zhi)計算出標準曲線的(de)直線回歸方程(cheng)，再根據樣品的(de)OD值在回歸方程上計(ji)算出對應(ying)的樣(yang)(yang)品(pin)濃度(du)。也可以使用各種應(ying)用軟件來計(ji)算。應(ying)記住由于樣(yang)(yang)品(pin)稀(xi)釋了的，其實際(ji)濃度(du)應(ying)該乘以總稀(xi)釋倍數(shu)。

親和素是一種糖蛋白，一(yi)分子親(qin)和(he)(he)素可以與四個生物素小分子發生專一(yi)親(qin)和(he)(he)作用，類(lei)似(si)抗(kang)原與抗(kang)體親(qin)和(he)(he)。它(ta)們(men)之間的作用力是(shi)目前已知強的非共價作用。80年代(dai)后，隨著(zhu)生物素-親合素系統（BAS）作用被發現，這一親和作用被結合應用到ELISA技(ji)術上，大大提高了(le)后者(zhe)反應的靈(ling)敏性與專一性。生物素很(hen)易與(yu)蛋白質（如抗體(ti)等）以共價鍵結合(he)。這樣(yang)，結合(he)了酶的親和素分子與結合(he)有特異性抗體(ti)(ti)的生物素分子產生反(fan)應，既起到(dao)了多(duo)級(ji)放大作用(yong)，又由于(yu)酶在遇到(dao)相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗(kang)原（或抗(kang)體(ti)）分(fen)子的目的。