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基(ji)質金(jin)屬蛋(dan)白酶（MMP-9）ELISA 試劑盒

ELISA用血清來檢測，首(shou)先血(xue)液要經過至少半個小時的凝集，然后取血(xue)清。將酶復合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性(xing)、陽性(xing)對照，還有(you)就(jiu)是(shi)質控品（這是(shi)嚴格的要求(qiu)，它的范(fan)圍(wei)必須在質控范(fan)圍(wei)內）。經過一個(ge)小(xiao)時的孵育，然后洗板，加底物，半個小時避光反(fan)(fan)應(ying)后加終止液即完(wan)成反(fan)(fan)應(ying)部分(fen)，然(ran)后就是讀數。由數值來判(pan)斷結果的陰性(xing)或陽(yang)性(xing)。

基質(zhi)金屬蛋(dan)白酶（MMP-9）ELISA 試(shi)劑盒

競爭法

1. 競爭法是一種較少用(yong)到(dao)的ELISA檢(jian)測機(ji)制，一般用(yong)于(yu)檢(jian)測小(xiao)分子抗原，其操作步驟(zou)為：

2. 將具有(you)專一性的抗體固著(zhu)于(yu)塑(su)膠孔盤上，完成后洗去多(duo)余抗體

3. 加入待(dai)測檢(jian)體，使檢(jian)體中(zhong)的(de)待(dai)測抗(kang)(kang)原與塑膠孔盤上的(de)抗(kang)(kang)體進行專(zhuan)一性鍵結

4. 加入帶有(you)酶的抗(kang)(kang)原(yuan)，此(ci)抗(kang)(kang)原(yuan)也(ye)可(ke)(ke)與(yu)(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)(kang)體(ti)進行專一性鍵(jian)結，由于塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)固著的抗(kang)(kang)體(ti)數量有(you)限，因此(ci)當檢體(ti)中抗(kang)(kang)原(yuan)的量越多，則帶有(you)酶的抗(kang)(kang)原(yuan)可(ke)(ke)鍵(jian)結的固著抗(kang)(kang)體(ti)就(jiu)越少，亦即(ji)，兩種抗(kang)(kang)原(yuan)皆競(jing)相與(yu)(yu)塑膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)抗(kang)(kang)體(ti)鍵(jian)結，即(ji)所(suo)謂競(jing)爭(zheng)法(fa)之由來。

5. 洗去檢(jian)體(ti)與帶有酶(mei)的抗原，加入(ru)酶(mei)底物使酶(mei)呈(cheng)色，當檢(jian)體(ti)中(zhong)抗原量越(yue)(yue)多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶(mei)的抗原越(yue)(yue)少(shao)，顯(xian)色也就越(yue)(yue)淺。

   當需(xu)要偵(zhen)測無法獲得(de)兩種以上單一(yi)性抗(kang)體(ti)的抗(kang)原(yuan)，或(huo)是不易得(de)到足夠的純化(hua)抗(kang)體(ti)以固(gu)著(zhu)于(yu)孔盤上時，一(yi)般(ban)會(hui)考慮使用(yong)競(jing)爭法ELISA。

操作程(cheng)序

1.   分別設空白孔(kong)(kong)(kong)（空白對照孔(kong)(kong)(kong)不加樣(yang)品(pin)(pin)及酶(mei)(mei)標(biao)(biao)試劑(ji)，其余各(ge)步操作相同(tong)）、標(biao)(biao)準品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)。在(zai)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)包被板上標(biao)(biao)準品(pin)(pin)孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)加入標(biao)(biao)準品(pin)(pin)50μl；在酶標包被板上待測樣(yang)品(pin)(pin)孔中先加樣(yang)品(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀(xi)釋度為5倍）。每孔加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑50μl，空白孔除外。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻(yun)，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩干，每(mei)孔(kong)加滿稀(xi)釋后洗滌液(ye)，振蕩30秒，甩去(qu)洗滌液，用(yong)吸水紙拍干。如此(ci)重復5次(ci)，拍(pai)干。

3.   每(mei)孔先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標板，每孔加終(zhong)止(zhi)液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuan)黃色）。

5.   測定：以空白(bai)孔調(diao)零，在(zai)450nm波長下測(ce)量(liang)各孔的(de)吸光度值（OD值）。 測定(ding)應在加終止液(ye)后15分鐘以(yi)內進行。

6.   根(gen)據標準品(pin)的濃(nong)度及對(dui)應的OD值計算出標準(zhun)曲線的(de)直線回歸(gui)方(fang)程，再根據樣品(pin)的(de)OD值在回(hui)歸(gui)方程(cheng)上計算(suan)出對應(ying)(ying)的樣品濃(nong)度(du)。也(ye)可以(yi)使用(yong)各種應(ying)(ying)用(yong)軟件來(lai)計算(suan)。應(ying)(ying)記(ji)住(zhu)由于樣品稀(xi)釋(shi)了的，其(qi)實際濃(nong)度(du)應(ying)(ying)該乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍數。