詳細請(qing)咨詢銷售人員(yuan)：

6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒

競爭法

競爭法可用(yong)于(yu)測(ce)定抗(kang)(kang)原，也可用(yong)于(yu)測(ce)定抗(kang)(kang)體(ti)。以測(ce)定抗(kang)(kang)原為例，受檢抗(kang)(kang)原和酶標(biao)抗(kang)(kang)原競爭與(yu)(yu)固相抗(kang)(kang)體(ti)結合(he)，因此結合(he)于(yu)固相的酶標(biao)抗(kang)(kang)原量(liang)與(yu)(yu)受檢抗(kang)(kang)原的量(liang)呈反比。操作步驟如下：

⑴將特異抗(kang)體與固相載(zai)體連(lian)接，形成固相抗(kang)體。洗(xi)滌。

⑵待測(ce)管中(zhong)加(jia)受(shou)檢標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)(ben)和一定量酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)混合溶(rong)液，使(shi)之(zhi)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)反應。如受(shou)檢標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)(ben)中(zhong)無抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)，則酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)能順利地與(yu)固(gu)(gu)(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)結(jie)合。如受(shou)檢標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)(ben)中(zhong)含有抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)，則與(yu)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)以(yi)同樣的(de)機會與(yu)固(gu)(gu)(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)結(jie)合，競(jing)爭(zheng)性(xing)地占去了酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相載體(ti)結(jie)合的(de)機會，使(shi)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相載體(ti)的(de)結(jie)合量減少。參考管中(zhong)只加(jia)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)，保溫后，酶(mei)(mei)(mei)標(biao)(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)與(yu)固(gu)(gu)(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)的(de)結(jie)合可達(da)充(chong)分(fen)的(de)量。洗滌(di)。

⑶加底物顯色(se)(se)：參考管中(zhong)由于結合的酶標抗(kang)(kang)原多(duo)，故顏(yan)色(se)(se)深(shen)(shen)。參考管顏(yan)色(se)(se)深(shen)(shen)度與(yu)待(dai)測(ce)管顏(yan)色(se)(se)深(shen)(shen)度之差，代表(biao)受檢標本(ben)抗(kang)(kang)原的量。待(dai)測(ce)管顏(yan)色(se)(se)越淡，表(biao)示標本(ben)中(zhong)抗(kang)(kang)原含量越多(duo)。一般情況，是通過(guo)方(fang)波(bo)伏安法(fa)，檢測(ce)培養體(ti)系的峰電(dian)流，通過(guo)峰電(dian)流與(yu)抗(kang)(kang)原抗(kang)(kang)體(ti)的線性關系來終(zhong)確(que)定(ding)體(ti)系的終(zhong)檢測(ce)目(mu)標的濃度。

當抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)材料(liao)中的(de)(de)(de)干擾(rao)物質不(bu)易(yi)(yi)除去，或不(bu)易(yi)(yi)得到(dao)足夠(gou)的(de)(de)(de)純(chun)化抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)時(shi)，可用(yong)此法(fa)檢測(ce)特異性(xing)(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)。其原(yuan)(yuan)(yuan)理為標(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)中的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)和(he)一定量(liang)的(de)(de)(de)酶標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)競(jing)(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)(zheng)與(yu)固(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)結合。標(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)中抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)量(liang)越(yue)多(duo)，結合在固(gu)相上的(de)(de)(de)酶標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)愈(yu)少，因此陽性(xing)(xing)反應呈色淺于陰性(xing)(xing)反應。如抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)為高純(chun)度的(de)(de)(de)，可直接(jie)包被(bei)固(gu)相。如抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)中會有干擾(rao)物質，直接(jie)包被(bei)不(bu)易(yi)(yi)成功，可采(cai)(cai)用(yong)捕獲包被(bei)法(fa)，即先包被(bei)與(yu)固(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)相應的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)，然后加入抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)，形成固(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)。洗(xi)滌(di)除去抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)中的(de)(de)(de)雜質，然后再(zai)加標(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)和(he)酶標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)進行競(jing)(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)(zheng)結合反應。競(jing)(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)(zheng)法(fa)測(ce)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)有多(duo)種模式(shi)，可將(jiang)標(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)和(he)酶標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)與(yu)固(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)競(jing)(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)(zheng)結合，抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)HBc ELISA一般采(cai)(cai)用(yong)此法(fa)。另一種模式(shi)為將(jiang)標(biao)(biao)(biao)(biao)本(ben)與(yu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)一起(qi)加入到(dao)固(gu)相抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)中進行競(jing)(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)(zheng)結合，洗(xi)滌(di)后再(zai)加入酶標(biao)(biao)(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)，與(yu)結合在固(gu)相上的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)反應。抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)HBe的(de)(de)(de)檢測(ce)一般采(cai)(cai)用(yong)此法(fa)。

6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒

定量測定

ELISA操作(zuo)步驟復(fu)雜，影(ying)響(xiang)反應因素較(jiao)多，特別是固相載體的(de)包被難達(da)到各個體之間(jian)的(de)*，因此在定量(liang)測(ce)定中，每批測(ce)試均(jun)須用(yong)一(yi)系(xi)列(lie)不(bu)同濃度(du)的(de)參(can)考(kao)標準(zhun)品(pin)在相同的(de)條件(jian)下制作(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)。測(ce)定大分子(zi)量(liang)物質的(de)夾(jia)心法ELISA，標準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)范圍一(yi)般較(jiao)寬(kuan)，曲(qu)線(xian)高(gao)點的(de)吸光度(du)可接(jie)近2.0，繪制時(shi)常(chang)用(yong)半對數(shu)值，以(yi)檢(jian)測(ce)物的(de)濃度(du)為橫坐(zuo)標，以(yi)吸光度(du)為縱坐(zuo)標，將各濃度(du)的(de)值逐點連接(jie)，所得曲(qu)線(xian)一(yi)般呈S形，其頭、尾部曲(qu)線(xian)趨(qu)于平坦，中央較(jiao)呈直線(xian)的(de)部分是理想(xiang)的(de)檢(jian)測(ce)區(qu)域(yu)。

測定(ding)(ding)小分子量物質常用競爭法，其標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線中吸光度與受(shou)檢(jian)物質的(de)濃度呈負相關。標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線的(de)形(xing)狀(zhuang)因(yin)試劑盒所(suo)用模式的(de)差別而略有(you)不同。ELISA測定(ding)(ding)的(de)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)線注意圖中橫(heng)坐(zuo)標(biao)(biao)為對數關系，這更(geng)有(you)利(li)于測定(ding)(ding)系統(tong)的(de)表達。

6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑盒

操作程序(xu)

1.   分(fen)別(bie)設空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不加樣品(pin)(pin)(pin)(pin)及酶標(biao)(biao)試劑(ji)，其(qi)余(yu)各步操作相(xiang)同）、標(biao)(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)。在酶標(biao)(biao)包被(bei)板上(shang)標(biao)(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)孔(kong)中加入標(biao)(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)50μl；在(zai)酶標包被(bei)板上(shang)待(dai)測(ce)樣(yang)品孔中先加樣(yang)品稀釋液40μl，然(ran)后再加待(dai)測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍(bei)）。每孔加入酶標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔除(chu)外。輕(qing)輕(qing)晃動混勻，37℃溫育60分(fen)鐘。

2.   棄去(qu)液(ye)體，甩干(gan)，每孔加滿(man)稀釋后洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩(shuai)去洗滌(di)液，用吸水(shui)紙拍干。如此重(zhong)復5次，拍干。

3.   每孔先加入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻(yun)，37℃避光顯(xian)色15分鐘.

4.   取出酶標板，每(mei)孔加(jia)終止液50μl，終止(zhi)反應（此時藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。

5.   測(ce)定：以(yi)空(kong)白孔調零，在450nm波長下(xia)測(ce)量各孔的吸光度(du)值（OD值）。 測定應在加(jia)終(zhong)止液后15分(fen)鐘以內進行。

6.   根(gen)據標(biao)準品的濃度及對應的OD值計算(suan)出標準(zhun)曲線的直線回(hui)歸方(fang)程(cheng)，再根據樣(yang)品的OD值在回歸(gui)方程上計算出對應(ying)的(de)樣品濃(nong)度(du)。也可以使(shi)用各種應(ying)用軟件來(lai)計算。應(ying)記住(zhu)由于樣品稀釋了的(de)，其(qi)實際濃(nong)度(du)應(ying)該乘以總(zong)稀釋倍數。