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促黃(huang)體生成素（LH）ELISA 試劑(ji)盒

捕獲法

血清中針(zhen)對某些(xie)抗(kang)原的特(te)(te)異(yi)性(xing)(xing)IgM常和(he)特(te)(te)異(yi)性(xing)(xing)IgG同時存在，后(hou)者會干擾IgM抗(kang)體的測定(ding)(ding)。因此(ci)測定(ding)(ding)IgM抗(kang)體多用捕獲法，先(xian)將所(suo)有(you)血清IgM（包(bao)括異(yi)性(xing)(xing)IgM和(he)非(fei)特(te)(te)異(yi)性(xing)(xing)IgM）固定(ding)(ding)在固相上(shang)，在去除IgG后(hou)再測定(ding)(ding)特(te)(te)異(yi)性(xing)(xing)IgM。操作步驟如下：

⑴將抗人IgM抗體連接(jie)在固相(xiang)載體上，形成固相(xiang)抗人IgM。洗滌。

⑵加入稀釋的(de)血(xue)清標本：保(bao)溫(wen)反(fan)應后(hou)血(xue)清中(zhong)的(de)IgM抗體(ti)被固相抗體(ti)捕(bu)獲。洗滌(di)除去其他免疫球蛋(dan)白和血(xue)清中(zhong)的(de)雜質成分。

⑶加入特(te)異(yi)性抗原試劑：它只(zhi)與固相上的特(te)異(yi)性IgM結(jie)合。洗滌。

⑷加入針對特異性的(de)酶(mei)標抗體：使(shi)之(zhi)與結(jie)合(he)(he)在固相上的(de)抗原反應結(jie)合(he)(he)。洗滌。

⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 

促(cu)黃體生成素（LH）ELISA 試劑盒(he)

定量測定

ELISA操作步驟復雜，影(ying)響(xiang)反應因素較(jiao)多，特別是固相載體的(de)(de)包被(bei)難達(da)到各(ge)個體之間的(de)(de)*，因此在(zai)定量(liang)測(ce)(ce)定中，每批測(ce)(ce)試均須用一系列不同(tong)濃度(du)的(de)(de)參考標準(zhun)品在(zai)相同(tong)的(de)(de)條件下制(zhi)作標準(zhun)曲線(xian)。測(ce)(ce)定大(da)分子量(liang)物質的(de)(de)夾(jia)心(xin)法ELISA，標準(zhun)曲線(xian)的(de)(de)范圍一般較(jiao)寬，曲線(xian)高點的(de)(de)吸光度(du)可接(jie)近(jin)2.0，繪制(zhi)時常用半對數值，以檢測(ce)(ce)物的(de)(de)濃度(du)為(wei)橫坐(zuo)標，以吸光度(du)為(wei)縱坐(zuo)標，將各(ge)濃度(du)的(de)(de)值逐點連接(jie)，所得曲線(xian)一般呈(cheng)S形，其頭、尾部(bu)曲線(xian)趨于平坦，中央較(jiao)呈(cheng)直線(xian)的(de)(de)部(bu)分是理(li)想的(de)(de)檢測(ce)(ce)區域(yu)。

測(ce)定小分子量物(wu)質常用競爭法，其(qi)標準(zhun)曲線中吸(xi)光度(du)(du)與(yu)受檢物(wu)質的(de)濃度(du)(du)呈負相關。標準(zhun)曲線的(de)形狀因(yin)試劑(ji)盒所用模(mo)式的(de)差(cha)別而略(lve)有不同。ELISA測(ce)定的(de)標準(zhun)曲線注(zhu)意圖中橫坐標為(wei)對數關系，這更有利(li)于測(ce)定系統的(de)表達。

操作程(cheng)序(xu)

1.   分別(bie)設空白孔(kong)(kong)（空白對(dui)照孔(kong)(kong)不(bu)加(jia)樣品(pin)(pin)及酶(mei)標試劑，其(qi)余各步操作相(xiang)同）、標準(zhun)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)、待測樣品(pin)(pin)孔(kong)(kong)。在酶(mei)標包被板上(shang)標準(zhun)品(pin)(pin)孔(kong)(kong)中加(jia)入標準(zhun)品(pin)(pin)50μl；在酶標(biao)包(bao)被板上待測樣(yang)品(pin)孔中先加樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然后再(zai)加(jia)待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為(wei)5倍）。每孔加入(ru)酶標試(shi)劑50μl，空白孔除(chu)外。輕(qing)輕(qing)晃動混勻，37℃溫育60分鐘(zhong)。

2.   棄(qi)去液體(ti)，甩干(gan)，每(mei)孔加滿(man)稀(xi)釋后洗滌液，振(zhen)蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍(pai)干。如此重復5次，拍干。

3.   每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色15分鐘.

4.   取(qu)出酶標板，每孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止反應（此時藍色(se)(se)立(li)轉黃色(se)(se)）。

5.   測定：以空白孔調零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值(zhi)）。 測定應在加終(zhong)止液后(hou)15分鐘以內(nei)進行。

6.   根據(ju)標準品的濃度及對(dui)應的OD值計算出(chu)標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品(pin)的OD值在回(hui)歸方程上計(ji)算出對應(ying)的樣品濃度。也(ye)可(ke)以(yi)使用各種(zhong)應(ying)用軟件來計(ji)算。應(ying)記住由于樣品稀釋了(le)的，其實(shi)際濃度應(ying)該乘以(yi)總稀釋倍數。